病理学技术服务

透射电镜

实验原理

以电子束为光源,用轴对称的电磁线圈作为透镜来成像,透过样本的电子束经过多个物镜放大后在荧光屏上成像,从而有更高的分辨率和放大倍数;


实验步骤

1. 细胞团或者组织块用2.5%的戊二醛4度避光固定。

2. 0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)漂洗3次,每次15分钟。

3. 1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)室温(20℃)固定2小时。

4. 0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)漂洗3次,每次15分钟。

5. 脱水:50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精上行脱水,每次15分钟。

6. 渗透:丙酮:812包埋剂=1:1混合液渗透过夜,纯812包埋剂渗透过夜。

7. 包埋:60度聚合48h。

8. 切片:60-80nm超薄切片。

9. 染色:铀铅双染色(2%醋酸铀饱和水溶液,枸橼酸铅,各染色15min)切片室温干燥过夜
10.电镜观察。

结果判读

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注意事项

1.2.5%戊二醛固定,(2.5%戊二醛预冷至少1小时以上;磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷,容易结晶)
2.取材需快速完成,保持细胞原来生活状态;
3.取材大小1mmx1mmx1mm(不定位组织),0.5mmx1mmx3mm(定位组织)

透射电镜样本准备方法及要求.docx


                                                           送检要求

           样品类型

                                         样本需求

        保存条件

       运输条件

          动物组织

单个样品大于0.1g

-80℃

干冰

种子样本

单个样品大于0.2g

-80℃

干冰

细胞样本

          qPCR/WB:单个样本不少于106个细胞

-80℃

干冰

血液样本

骨髓1-3ml;用抗凝管保存的外周血5-10ml

-80℃

干冰

石蜡包埋样本

包埋石蜡块大于0.1cm

-20℃

冰袋

抗体

提供足量,并附带抗体说明书

-20℃

冰袋

引物

如需预实验,引物两对,附带引物合成单

-20℃

冰袋

备注:每个样本仅保留唯一且清析可识的标记;邮寄前请与公司专业人员确认方法最佳;

特别注意:用封口膜将1.5mlEP 管管盖再次封好,做好标记,随后插在海绵板或可以减震的塑料上,用废旧报纸包裹,放入1-2个冰袋,样品尽可能远离水袋固定放置,以防样品出现水晶损伤,寄出。


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