实验原理
以电子束为光源,用轴对称的电磁线圈作为透镜来成像,透过样本的电子束经过多个物镜放大后在荧光屏上成像,从而有更高的分辨率和放大倍数;
实验步骤
1. 细胞团或者组织块用2.5%的戊二醛4度避光固定。
2. 0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)漂洗3次,每次15分钟。
3. 1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)室温(20℃)固定2小时。
4. 0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)漂洗3次,每次15分钟。
5. 脱水:50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精上行脱水,每次15分钟。
6. 渗透:丙酮:812包埋剂=1:1混合液渗透过夜,纯812包埋剂渗透过夜。
7. 包埋:60度聚合48h。
8. 切片:60-80nm超薄切片。
9. 染色:铀铅双染色(2%醋酸铀饱和水溶液,枸橼酸铅,各染色15min)切片室温干燥过夜
10.电镜观察。
结果判读
注意事项
1.2.5%戊二醛固定,(2.5%戊二醛预冷至少1小时以上;磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷,容易结晶)
2.取材需快速完成,保持细胞原来生活状态;
3.取材大小1mmx1mmx1mm(不定位组织),0.5mmx1mmx3mm(定位组织)
送检要求
样品类型 | 样本需求 | 保存条件 | 运输条件 |
动物组织 | 单个样品大于0.1g | -80℃ | 干冰 |
种子样本 | 单个样品大于0.2g | -80℃ | 干冰 |
细胞样本 | qPCR/WB:单个样本不少于106个细胞 | -80℃ | 干冰 |
血液样本 | 骨髓1-3ml;用抗凝管保存的外周血5-10ml | -80℃ | 干冰 |
石蜡包埋样本 | 包埋石蜡块大于0.1cm | -20℃ | 冰袋 |
抗体 | 提供足量,并附带抗体说明书 | -20℃ | 冰袋 |
引物 | 如需预实验,引物两对,附带引物合成单 | -20℃ | 冰袋 |
备注:每个样本仅保留唯一且清析可识的标记;邮寄前请与公司专业人员确认方法最佳; |
特别注意:用封口膜将1.5mlEP 管管盖再次封好,做好标记,随后插在海绵板或可以减震的塑料上,用废旧报纸包裹,放入1-2个冰袋,样品尽可能远离水袋固定放置,以防样品出现水晶损伤,寄出。