ALP染色

实验原理

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸不萘酚，后者不偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞浆，结果较金属盐沉淀法可靠。

ALP染色临床意义

临床上碱性磷酸酶染色法对以下疾病有鉴别意义：类白血病反应显著增高，慢性粒细胞白血病 (无继发感染) 显著减低;急性细菌感染伴白细胞增多时，积分显著升高，病毒性感染时多正常；真红细胞增多症积分升高，继发性红细胞增多者则正常，而阵发性血红蛋白尿症则减低；再生障碍性贫血患者明显升高，淋巴细胞白血病往往积分升高，但该病成熟的中性粒细胞较少，较难判断。

实验步骤

Step1：石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

Step2：冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中4℃固定2-5分钟。

Step3：切片入试剂A，37℃孵育。冰冻切片5-15分钟，石蜡切片2-12小时。流水冲洗2分钟后入蒸馏水。

Step4：入试剂B，37℃, 5分钟。

Step5：流水冲洗s分钟后入蒸馏水。

Step6：试剂C用蒸馏水50倍稀释，即配即用。

Step7：切片入试剂C稀释液2分钟。

Step8：流水冲洗10分钟后入蒸馏水。

Step9：冰冻切片用甘油明胶封片;石蜡切片常规脱水，透明，树胶封片。

结果判读

表达为蓝黑色，细胞核为红色。

                     ALP-MC3T3-E1-诱导-200x                                                      ALP-MC3T3-E1-正常-200x

注意事项

1，血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，厚薄适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2，ALP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

3，每次染色时，应有阳性对照片。           

                                                             送检要求