实验原理
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸不萘酚,后者不偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞浆,结果较金属盐沉淀法可靠。
ALP染色临床意义
临床上碱性磷酸酶染色法对以下疾病有鉴别意义:类白血病反应显著增高,慢性粒细胞白血病 (无继发感染) 显著减低;急性细菌感染伴白细胞增多时,积分显著升高,病毒性感染时多正常;真红细胞增多症积分升高,继发性红细胞增多者则正常,而阵发性血红蛋白尿症则减低;再生障碍性贫血患者明显升高,淋巴细胞白血病往往积分升高,但该病成熟的中性粒细胞较少,较难判断。
实验步骤
Step1:石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
Step2:冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中4℃固定2-5分钟。
Step3:切片入试剂A,37℃孵育。冰冻切片5-15分钟,石蜡切片2-12小时。流水冲洗2分钟后入蒸馏水。
Step4:入试剂B,37℃, 5分钟。
Step5:流水冲洗s分钟后入蒸馏水。
Step6:试剂C用蒸馏水50倍稀释,即配即用。
Step7:切片入试剂C稀释液2分钟。
Step8:流水冲洗10分钟后入蒸馏水。
Step9:冰冻切片用甘油明胶封片;石蜡切片常规脱水,透明,树胶封片。
结果判读
表达为蓝黑色,细胞核为红色。
ALP-MC3T3-E1-诱导-200x ALP-MC3T3-E1-正常-200x
注意事项
1,血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,厚薄适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。
2,ALP孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。
3,每次染色时,应有阳性对照片。
送检要求
样品类型 | 样本需求 | 保存条件 | 运输条件 |
动物组织 | 单个样品大于0.1g | -80℃ | 干冰 |
种子样本 | 单个样品大于0.2g | -80℃ | 干冰 |
细胞样本 | qPCR/WB:单个样本不少于106个细胞 | -80℃ | 干冰 |
血液样本 | 骨髓1-3ml;用抗凝管保存的外周血5-10ml | -80℃ | 干冰 |
石蜡包埋样本 | 包埋石蜡块大于0.1cm | -20℃ | 冰袋 |
抗体 | 提供足量,并附带抗体说明书 | -20℃ | 冰袋 |
引物 | 如需预实验,引物两对,附带引物合成单 | -20℃ | 冰袋 |
备注:每个样本仅保留唯一且清析可识的标记;邮寄前请与公司专业人员确认方法最佳; |