Masson染色

实验原理

      所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理不阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

实验步骤

1． 石蜡切片脱蜡至水。

2． 铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

3． 依次自来水和蒸馏水洗。

4． 用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。

5． 充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。

6． 蒸馏水洗。

7． 用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。

8． 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5min。

10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。

11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果判读

胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

                      masson-人皮肤(瘢痕)-100X                                             masson-人皮肤(瘢痕)-200X

注意事项

1．控制好染色步骤。

2．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳。

4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制， 肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。

常见问题解析

1、细胞核染色过淡，与细胞质对比差。可能原因包括：①未使用铁苏木精进行细胞核染色，随后的丽春红酸性品红染料去除了细胞核染色；②未使用新鲜配制的铁苏木精，致氧化过度；③细胞核染色时间不足导致染色较弱；④复染分化差，掩盖了细胞核染色。解决方案包括：①避免使用明矾苏木精；②在使用前混合等量的铁苏木精储备溶液，以获得较强的细胞核染色；③确定铁苏木精染色的最佳时间；④确保红色和蓝色复染的正确分化。

2、细胞核染色过深而模糊。可能原因包括：①铁苏木精过染；②铁苏木精染色后洗涤不足。解决方案包括：①确定铁苏木精染色的最佳时间；②铁苏木精染色后用70%乙醇快速冲洗，然后在自来水中彻底清洗。

3、细胞质染色过浅，组织结构不明确。可能原因包括：①长时间水洗；②脱水过程中，在乙醇中停留时间过长；③甲醛固定的组织在染色前未经后固定处理；④使用陈旧的或多次使用的染色试剂；⑤组织自溶或固定延迟，导致组织结构保存不良。解决方案包括：①缩短洗涤时间；②封固前避免在脱水溶液中长时间存放；③甲醛固定的组织在染色前应使用Bouin溶液、苦味酸溶液或氯化汞溶液预处理，以达到所需的媒染效果；④细胞质染料溶液使用不应超过2次。

4、平滑肌纤维未染色或呈灰色而非红色。可能原因包括：①铁苏木精过染，或未结合的铁苏木精去除不充分；②使用陈旧的或多次使用的染色试剂；③甲醛固定的组织在染色前未进行预处理。解决方案包括：①调整铁苏木精染色时间；②铁苏木精染色后使用70%乙醇和水彻底清洗；③及时更换新试剂；④甲醛固定的组织在染色前用Bouin溶液、苦味酸溶液或氯化汞溶液进行预处理，以达到所需的媒染效果。

5、组织结构呈现错误的染色或染色不均匀。可能原因包括：①甲醛固定的组织在染色前未经后固定；②组织分化不当；③1种或多种染色液的pH值不正确；④在乙酸溶液中清洗不当。解决方案包括：①甲醛固定的组织在染色前应使用Bouin溶液、苦味酸溶液或氯化汞溶液后固定，以达到所需的媒染效果；②正确的分化，要求染色过程中每个步骤时间准确，避免在乙酸溶液中长时间洗涤，以防止去除所需结构上的染料；③验证染料溶液的pH值是否为2.5或更低。

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