油红O染色

实验原理

        油红O能特异性地与组织和细胞内的中性甘油三酯、脂质以及脂蛋白产生吸附作用从而使脂肪染色。染料在胞内脂质中的溶解度较溶液更大，当染料加入组织切片时，染料从有机溶剂转移而溶于组织内的脂质中，使组织内的脂肪呈红色。该染色方法用于分析细胞样品中脂质状况。

实验步骤

1．切片用甲醛―钙固定10分钟；

2．蒸馏水洗；

3．60％异丙醇浸洗；

4．油红O染液10分钟(染液可回收再利用)；

5． 60％异丙醇分色至背景五色；

6．蒸馏水洗；

7．Mayer苏木精复染；

8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；

9．蒸馏水洗；

10．甘油明胶封片。

11.显微镜镜检/扫描软件，图像采集分析。

结果判读

组织中脂滴呈橘红色，细胞核呈蓝色。

            Raw264.7 ① OX-LDL 油红 5.17_20.0x                                  Raw264.7 正 148① 5.20_20.0x

             THP-1 ⑥ 全50 油红 5.24_20.0x                                             THP-1 正 全 油红 5.24_20.0x

注意事项

1. 石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡，二甲苯是有机溶剂，会把中性脂肪溶解；

2. 冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，原因在于若选择液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程比较缓和，染出来的片子比较好看；

3. 切片的厚度要稍微厚一些，建议选择8-10μm；

4. 实验设计建议设计阴性对照和阳性对照，如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等，阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。

5.完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

6.细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。

                                                                  送检要求