甲苯胺蓝染色

实验原理

 甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种，属于醌亚胺染料类，这类染料一般含有两个发色团，一个是胺基，一个是醌型苯环，来构成色原显色。染料除有发色团外，还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，为碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

实验步骤

  1、脱蜡

        （1）70℃烤片5min；

        （2）二甲苯（I）中脱蜡10 min；

        （3）二甲苯（II）中脱蜡10 min；

        （4）100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

        （5） 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

        2、水化

        （1）95%乙醇中水化1 min；

        （2）85%乙醇中水化1 min；

        （3）75%乙醇中水化1 min；

        （4）蒸馏水中水化待用；

        3、染色

        （1）甲苯胺蓝染色液染色30min；

        （2）流水冲洗2 min；

        （3）1%盐酸酒精分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见；

        （4）流水冲洗切片5 min；

        （5）蒸馏水过洗1-2 s；

        4、脱水

        （1）85%乙醇脱水1 min；

        （2）95%乙醇脱水1min；

        （3）无水乙醇脱水1min；

        （4）无水乙醇脱水1min；

        5、透明

        （1）二甲苯（I）透明2 min；

        （2）二甲苯（II）再次透明2min；

        6、封片、镜检

        在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固，显微镜下观察拍照。

结果判读

肥大细胞、尼氏体呈蓝色。

                     尼氏染色-小鼠脑-50X                                                       尼氏染色-小鼠脑-200X

注意事项

1、注意软骨和背景的分化程度;

2、注意甲苯胺蓝染液的效价，及时更换染液

                                                              送检要求