1 背景
缺血性脑血管病(ICVD)是威胁人类健康与生存的主要疾病之一,是中老年人的常见病,具有发病率、死亡率、致残率、复发率高的特点,是目前重点防治的一种疾病。大脑中动脉(MCA)为临床上发生脑缺血损伤最常见的部位之一。故大脑中动脉阻塞(MCAO)模型被广泛用于局灶性脑缺血的研究。用血管内线栓阻断法制备大鼠MCAO模型,已被脑血管病研究者广泛接受和采用。目前实验室较多采用MCA阻断0min、90min和120min的短暂脑缺血-再灌注模型。
2 动物信息
品系:SD大鼠
性别:雄性
周龄:6-8周
体重:230-260g
3 操作流程
1)动物适应性饲养7天;
2)大鼠麻醉后以仰卧位固定在解剖板上,颈部备皮,消毒;沿颈部正中切开皮肤。钝性分离皮下组织,在分离过程中会看到颌下腺,将腺体轻轻推到一侧,分离到气管前肌后,沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离,见到颈动脉鞘后可用拉钩将皮肤肌肉固定好。此时可见到颈总动脉,小心向头侧跟心侧剥离劲动脉跟其随行的神经,注意动作要轻,不要损伤神经。剥离到头侧约0.5cm时可以看到颈总动脉分成颈内动脉跟颈外动脉,继续剥离2根血管跟神经,此时用预先准备好的丝线结扎颈总动脉(尽量靠心端),另外一根套在上面轻轻打一个活结备用,结扎颈外动脉(尽量接近分叉处),用血管夹夹闭颈内动脉。将老鼠手术部位移至体视镜下,用显微剪在颈总动脉上斜行剪一个小口,注意小口长度不要超过血管周长的三分之一,用显微镊夹起MCAO线拴从血管上的小口穿入血管,穿到分叉处时轻轻提起结扎颈总动脉的丝线,此时颈总动脉跟颈内动脉会在一条直线上,线拴就很容易进入到颈内动脉,待线拴进入到血管夹的位置时,稍微拉紧之前打活结的丝线,松开血管夹,继续向里面推送线拴,直到线拴上标记物到达血管分叉的位置。拉紧活结。缝合肌肉跟皮肤(一针),注意线拴留在皮肤外面的不要太长,以免被老鼠拔出。
3)缺血后2h,拔出线栓,系紧活结。重新缝合后放回笼舍中,注意保暖。
4 实验结果展示
1)迅速将大鼠大脑取出,用冷盐水冲洗后,快速放于-20℃冰箱中放置10分钟,待脑组织稍硬后,取出切掉嗅球、垂体、低位脑干,由前向后冠状切片,均匀切成2 mm厚脑片,等分切成5片,置于1%TTC溶液中,37℃避光孵育30分钟,每隔5分钟左右翻动一次。TTC可与正常组织内的脱氢酶系统反应被还原为玫瑰红色,因此使组正常组织染呈玫瑰红色,梗死组织呈白色。
2)脑HE染色,观察组织细胞形态:假手术组神经细胞、胶质细胞及毛细血管形态正常,结构完整,核仁清晰,胞浆无红染。模型组,神经细胞大片消失,坏死区边缘可见神经细胞变性,缺血周围区锥体细胞明显减少,胞体变小,尼氏小体消失,核固缩深染;星形细胞和小胶质细胞增生,星形细胞肿胀。