实验简介
慢病毒(lentivirus)属于逆转录病毒科(Retrovidae),为RNA 病毒。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有嗜核特性,病毒基因组通过顺式作用元件运输至细胞核,并将要表达的基因序列整合到细胞的基因组中,从而使慢病毒可以感染并在非有丝分裂细胞中复制,得到持续稳定的高表达。
实验步骤
1. 构建目的基因慢病毒质粒
2. 将293T 细胞传代至60%~70%汇合时,用脂质体法将慢病毒包装质粒共转染至细胞。
3. 体外培养48小时,荧光显微镜下观察,大量细胞表达绿色荧光蛋白,说明质粒转染成功。
4. 培养48-72小时后,收获含慢病毒颗粒的细胞上清液。并感染293T 细胞进行验毒。
5. 根据后续实验需要选择是否进行浓缩
结果展示
送检要求
样品类型 | 样本需求 | 保存条件 | 运输条件 |
动物组织 | 单个样品大于0.1g | -80℃ | 干冰 |
种子样本 | 单个样品大于0.2g | -80℃ | 干冰 |
细胞样本 | qPCR/WB:单个样本不少于106个细胞 | -80℃ | 干冰 |
血液样本 | 骨髓1-3ml;用抗凝管保存的外周血5-10ml | -80℃ | 干冰 |
石蜡包埋样本 | 包埋石蜡块大于0.1cm | -20℃ | 冰袋 |
抗体 | 提供足量,并附带抗体说明书 | -20℃ | 冰袋 |
引物 | 如需预实验,引物两对,附带引物合成单 | -20℃ | 冰袋 |
备注:每个样本仅保留唯一且清析可识的标记;邮寄前请与公司专业人员确认方法最佳; |